Wolf K45E Manuel d'utilisateur Page 1

Aus dem Medizinischen Zentrum für Kinderheilkundeder Philipps-Universität MarburgGeschäftsführender Direktor: Prof. Dr. med. H.W. SeyberthAbteilung fü

Einleitung 3_____________________________________________________________________________________antenatale Form des Bartter-Syndroms. Neben der hypok

Diskussion_____________________________________________________________________________________93Bei der Patientin P81 konnten zwei heterozygote Mutat

Diskussion_____________________________________________________________________________________94Kanalfunktion aufgrund einer schwerwiegenden Änderung

Diskussion_____________________________________________________________________________________95Membranoberfläche verlaufenden Achsen. Jede der beide

Diskussion_____________________________________________________________________________________96Die Diskussion der Mutationen gestaltet sich sicher s

Diskussion_____________________________________________________________________________________972EJOHLFK GLH .+HOL[ 5 NHLQH 7UDQVPHPEUDQGRPäne

Diskussion_____________________________________________________________________________________98ClC-Ka handelt und die Deletion im A-Kanal des Patien

Diskussion_____________________________________________________________________________________99relevanten Mutationen erneut im Bereich der Kandidate

Diskussion_____________________________________________________________________________________100des langstreckigen Verlustes von Aminosäuren ist sic

Diskussion_____________________________________________________________________________________1014.3 PathophysiologieIm dicken aufsteigenden Teil de

Diskussion_____________________________________________________________________________________102die Tubuluszelle verlassen kann, der ClC-Kb stellt s

Einleitung 4_____________________________________________________________________________________Sowohl Hyperkalziurie, Nephrokalzinose, Polyhydramnio

Diskussion_____________________________________________________________________________________103Sowohl in dieser Arbeit als auch bei Untersuchungen

Diskussion_____________________________________________________________________________________104Gen existiert. Weitere molekulargenetische Untersuch

Zusammenfassung_____________________________________________________________________________________1055 ZusammenfassungDer Begriff Bartter-Syndrom st

Zusammenfassung_____________________________________________________________________________________106des dicken aufsteigenden Teils der Henleschen S

Literaturverzeichnis____________________________________________________________________________1076 LiteraturverzeichnisBartter FC, Pronove P, Gill j

Literaturverzeichnis____________________________________________________________________________108Brennan TMH, Landau D, Shalev H, Lamb F, Schutte BC

Literaturverzeichnis____________________________________________________________________________109Fanconi A, Schachenmann G, Nüssli R, Prader AChroni

Literaturverzeichnis____________________________________________________________________________110Guay-Woodford LMBartter syndrome: Unraveling the pa

Literaturverzeichnis____________________________________________________________________________111Jeck N, Reinalter S, Henne T, Marg W, Mallmann R, P

Literaturverzeichnis____________________________________________________________________________112Landau D, Shalev H, Ohaly M, Carmi RInfantile varia

Einleitung 5_____________________________________________________________________________________späteren Jugend diagnostiziert werden. Die beschriebe

Literaturverzeichnis____________________________________________________________________________113Mastroianni N, Bettinelli A, Bianchetti M, Colussi

Literaturverzeichnis____________________________________________________________________________114Mullis KB, Faloona FASpecific synthesis of DNA in v

Literaturverzeichnis____________________________________________________________________________115Rudin ABartter`s syndromeActa Med. Scand. 224: 165-

Literaturverzeichnis____________________________________________________________________________116Seyberth HW, Rascher W, Schweer H, Kühl PG, Mehls O

Literaturverzeichnis____________________________________________________________________________117Simon DB, Karet FE, Rodriguez-Soriano J, Hamdan JH,

Literaturverzeichnis____________________________________________________________________________118Waldegger S, Jeck N, Barth P, Peters M, Vitzthum H,

Anhang_________________________________________________________________________________1197 Anhang7.1 FragebogenFragebogen für das Bartter Syndrom(ant

Anhang_________________________________________________________________________________1203. Zeitpunkt der ErstmanifestationZeigte der/die PatientIn b

Anhang_________________________________________________________________________________1217. HypokaliämieGeben Sie den niedrigst gemessenen Kaliumwert

Anhang_________________________________________________________________________________1227.2 Verzeichnis der akademischen LehrerMeine akademischen L

Einleitung 6_____________________________________________________________________________________von Natrium und Chlorid [GILL JR. u. BARTTER 1978]. D

Anhang_________________________________________________________________________________1237.3 DanksagungIch danke Herrn Prof. Dr. med. H.W. Seyberth g

Anhang_________________________________________________________________________________124 Die vorliegende Arbeit wurde in Teilen in folgenden Publika

Einleitung 7_____________________________________________________________________________________bei den betroffenen Familien zeigten eine signifikant

Einleitung 8_____________________________________________________________________________________NKCC2-Kotransporter abhängig ist, sondern, wie die Ab

Einleitung 9_____________________________________________________________________________________1.2.3.2 Pathogenese des klassischen Bartter-SyndromsW

Einleitung 10_____________________________________________________________________________________1.2.3.3 Pathogenese des Gitelman-SyndromsÜberlegunge

Einleitung 11_____________________________________________________________________________________Mutationsanalysen geschaffen [MASTROIANNI et al. 199

Einleitung 12_____________________________________________________________________________________1.3 Zielsetzung dieser Arbeit1.3.1 MutationsanalyseI

II_____________________________________________________________________________________Angenommen vom Fachbereich Humanmedizinder Philipps-Universität

Einleitung 13_____________________________________________________________________________________Detektion von Mutationen in Form eines aberranten Ba

Einleitung 14_____________________________________________________________________________________alternatives Splicing fünf verschiedene Isoformen de

Einleitung 15_____________________________________________________________________________________1.3.1.3 Das ClC-Kb-Gen (ClC-Kb)Bei dem basolateral g

Einleitung 16_____________________________________________________________________________________Funktionsweise ist in Kapitel 4.2 dargestellt.Jüngst

Material und Methoden_____________________________________________________________________________________172 Material und Methoden2.1 PatientenDie in

Material und Methoden_____________________________________________________________________________________18aber erfolglos war. Eine Übersicht über di

Material und Methoden_____________________________________________________________________________________19• Feinwaage Modell R180D (Fa. Sartoriu

Material und Methoden_____________________________________________________________________________________20• TE-Puffer, pH 8,0• TAE-Puffer, pH 8,0• T

Material und Methoden_____________________________________________________________________________________212.3.2 DNA-Isolierung aus VollblutFür die D

Material und Methoden_____________________________________________________________________________________22Präparation zwischen 1,7 und 2,0 liegen. U

III_____________________________________________________________________________________InhaltsverzeichnisAbkürzungen ...

Material und Methoden_____________________________________________________________________________________23Kontamination schützen. Die Enzyme werden

Material und Methoden_____________________________________________________________________________________24der Reverse-Primer aus einer DNA-Basensequ

Material und Methoden_____________________________________________________________________________________25kenntlich gemacht. Eine schematische Darst

Material und Methoden_____________________________________________________________________________________262.5 Gelelektrophorese2.5.1 BeschreibungUm

Material und Methoden_____________________________________________________________________________________27beeinflussen die Laufgeschwindigkeit maßge

Material und Methoden_____________________________________________________________________________________28Nach Beendigung des Laufes wird das Gel fü

Material und Methoden_____________________________________________________________________________________29lässt die Auswertung des SSCP lediglich di

Material und Methoden_____________________________________________________________________________________30verändert.Die Kenntnis der Nukleotidsequen

Material und Methoden_____________________________________________________________________________________31Elektrodenpuffer Puffer pH 7,9Papierelektr

Material und Methoden_____________________________________________________________________________________32Luftblasen unter dem Gel zu vermeiden.Nach

IV_____________________________________________________________________________________2.3.1 Material...

Material und Methoden_____________________________________________________________________________________33aufgefüllt. Die Lösung wird gut durchgesch

Material und Methoden_____________________________________________________________________________________342.7 DNA-Sequenzierung2.7.1 BeschreibungZie

Material und Methoden_____________________________________________________________________________________35dass sie mit der PCR-Reaktion selbst nicht

Material und Methoden_____________________________________________________________________________________36Tabelle 2.2 Oligonukleotid-Sequenz zur

Material und Methoden_____________________________________________________________________________________37modernen Sequenzierern, da diese die Bande

Material und Methoden_____________________________________________________________________________________38Reagenz C ddCTP, Tris HCl pH 9,5,Magnesium

Material und Methoden_____________________________________________________________________________________39durch Probe-PCRs auszutesten und anschließ

Material und Methoden_____________________________________________________________________________________40Nach dem Aushärten wird der Laufpuffer her

Material und Methoden_____________________________________________________________________________________41Sequenz zur Überlagerung. Abbildung 2.7 ze

Ergebnisse_____________________________________________________________________________________423 Ergebnisse3.1 Mutationsanalyse3.1.1 Untersuchung de

V_____________________________________________________________________________________3.1.2 Untersuchung des ClC-Kb-Gens (ClC-Kb)...

Ergebnisse_____________________________________________________________________________________43des Kanals und damit verbunden zu einer Funktionsände

Ergebnisse_____________________________________________________________________________________44genannte stumme Mutationen. Dabei handelt es sich um

Ergebnisse_____________________________________________________________________________________45Marb. 7023Deutschl. 3 5.2 V315G T1001G Aminosäuren-Su

Ergebnisse_____________________________________________________________________________________46beschrieben und die Befunde der SSCP-Analyse und der

Ergebnisse_____________________________________________________________________________________47Marb. 7466:Bei dieser Patientin konnten im Exon 5.4 z

Ergebnisse_____________________________________________________________________________________48Bereich der Exone 1 und 2 auf. Auch in diesem Fall li

Ergebnisse_____________________________________________________________________________________49TCCAAGA CAAAGGAAGGBasesSer Lys Thr Lys

Ergebnisse_____________________________________________________________________________________50WildtypMarb. 7023 ROMK Ex. 5.1MMuuttaattiioonn ##

Ergebnisse_____________________________________________________________________________________51MMuuttaattiioonn ## 33Marb. 7023 ROMK Ex. 5.2Abbi

Ergebnisse_____________________________________________________________________________________52MMuuttaattiioonn ## 44T1031G ➫ F325CMarb. 7399TACCG

VI_____________________________________________________________________________________AbkürzungenAngaben in [...] sind MaßeinheitenAla ...

Ergebnisse_____________________________________________________________________________________53Marb. 7399 ROMK Ex. 5.2994CAAGTCCRGACATCCBases98298

Ergebnisse_____________________________________________________________________________________54MMuuttaattiioonn ## 66Marb. 7451 ROMK Ex. 5.2Wild

Ergebnisse_____________________________________________________________________________________55MMuuttaattiioonn ## 77Marb. 7451 ROMK Ex. 5.3Wild

Ergebnisse_____________________________________________________________________________________56MMuuttaattiioonn ## 88Marb. 7466 ROMK Ex. 5.4Wild

Ergebnisse_____________________________________________________________________________________57MMuuttaattiioonn ## 99Marb. 7466 ROMK Ex. 5.4Wild

Ergebnisse_____________________________________________________________________________________58MMuuttaattiioonn ## 1100TCCGAAGAT 187 188

Ergebnisse_____________________________________________________________________________________59MMuuttaattiioonn ## 1111Abbildung 3.12 Durch de

Ergebnisse_____________________________________________________________________________________60MMuuttaattiioonn ## 1122AGGTRCAACG203A ➫ C49Y 199

Ergebnisse_____________________________________________________________________________________61MMuuttaattiioonn ## 1133WildtypMarb. 7422 ROMK E

Ergebnisse_____________________________________________________________________________________62MMuuttaattiioonn ## 1144Marb. 7522 ROMK Ex. 1 un

VII_____________________________________________________________________________________HPS ...

Ergebnisse_____________________________________________________________________________________63WildtypMMuuttaattiioonn ## 1155Paris P 89 ROMK E

Ergebnisse_____________________________________________________________________________________64MMuuttaattiioonn ## 1166Paris P 81 ROMK Ex. 5.2A

Ergebnisse_____________________________________________________________________________________65MMuuttaattiioonn ## 1177Paris P 81 ROMK Ex. 5.3A

Ergebnisse_____________________________________________________________________________________66Nijmegen N 1 ROMK Ex. 5.2MMuuttaattiioonn ## 1188

Ergebnisse_____________________________________________________________________________________67Nijmegen N 1 ROMK Ex. 5.2MMuuttaattiioonn ## 1199

Ergebnisse_____________________________________________________________________________________683.1.2 Untersuchung des ClC-Kb-Gens (ClC-Kb)3.1.2.1 Al

Ergebnisse_____________________________________________________________________________________69spezifische Abfolge von 20 Basen, an die der Universa

Ergebnisse_____________________________________________________________________________________70Tabelle 3.4 Primer-Sequenzen für die SSCP-Analyse

Ergebnisse_____________________________________________________________________________________71Eine Übersicht über die klinischen Daten der Patiente

Ergebnisse_____________________________________________________________________________________72Tabelle 3.6 Übersicht über gefundene ClC-Kb-Mutat

Einleitung 1_____________________________________________________________________________________1 Einleitung1.1 EinführungVerschiedene erbliche Erkra

Ergebnisse_____________________________________________________________________________________73Marb. 7468:Bei diesem Patienten konnten zwei Mutation

Ergebnisse_____________________________________________________________________________________74Vater (DNA nicht vorhanden) weitergegeben oder es han

Ergebnisse_____________________________________________________________________________________75WildtypMMuuttaattiioonn ## 11Paris P 119 ClC-Kb

Ergebnisse_____________________________________________________________________________________76WildtypMMuuttaattiioonn ## 22Paris P 119 ClC-Kb

Ergebnisse_____________________________________________________________________________________77MMuuttaattiioonn ## 33WildtypMarb. 7468 ClC-Kb

Ergebnisse_____________________________________________________________________________________78MMuuttaattiioonn ## 33Mutation:Ins(TCT)TCAGGCTTC +D

Ergebnisse_____________________________________________________________________________________79WildtypMMuuttaattiioonn ## 44Marb. 7468 ClC-Kb E

Ergebnisse_____________________________________________________________________________________80WildtypMMuuttaattiioonn ## 55Marb. 7438 ClC-Kb E

Ergebnisse_____________________________________________________________________________________81MMuuttaattiioonn ## 66Marb.7089 ClC-Kb Ex. 1-19Zu

Ergebnisse_____________________________________________________________________________________82125212531254125512561257125812591260MMuuttaattiioonn

Einleitung 2_____________________________________________________________________________________hyperreninämischen Hyperaldosteronismus und eine hist

Ergebnisse_____________________________________________________________________________________83WildtypMMuuttaattiioonn ## 88Marb. 7491 ClC-Kb

Ergebnisse_____________________________________________________________________________________84WildtypMMuuttaattiioonn ## 99Paris P 106 ClC-Kb

Diskussion_____________________________________________________________________________________854 DiskussionIm folgenden Kapitel werden die in Kapite

Diskussion_____________________________________________________________________________________86Funktionsstörung des ROMK in diesem Tubulusabschnitt

Diskussion_____________________________________________________________________________________87Bei der Mutation #1 handelt es sich um eine homozygot

Diskussion_____________________________________________________________________________________88Klinisch zeigt die Patientin das phänotypische Bild e

Diskussion_____________________________________________________________________________________89(pH0,5) bei einem pHi von 6,8 liegt. Weitere Untersu

Diskussion_____________________________________________________________________________________90einer deutlichen Veränderung der Kanalfunktion aufgru

Diskussion_____________________________________________________________________________________91Bei der Mutation #10 handelt es sich um eine homozygo

Diskussion_____________________________________________________________________________________92Beide Patienten haben eine Deletion von mindestens 11