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Material und Methoden

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aufgefüllt. Die Lösung wird gut durchgeschüttelt und auf das Gel gegeben.

Während der folgenden Entwicklung werden die Banden sichtbar. Die Reaktion

sollte abgebrochen werden, sobald die Banden die höchste Schärfe erreicht

haben. Dazu wird die Entwicklerlösung verworfen und 250 ml Stop-Lösung 1x

hinzugefügt, in der das Gel mindestens 30 Minuten geschwenkt werden sollte.

Wird die Entwicklungsreaktion zu spät

abgestoppt, kommt es zur Dunkelfärbung des

Gels, die mit einem bisweilen deutlichen

Qualitätsverlust einhergeht. Zum Schluss wird

das Gel kurz mit deionisiertem Wasser gespült

und an der Luft getrocknet.

Zur Auswertung der Banden vergleicht man

die Bandenmuster der Patienten mit denen der

Kontrollen. Gesucht wird nach Abweichungen,

so genannten Band-Shifts (siehe Abbildung

2.4). Findet sich ein abberantes

Bandenmuster, muss zunächst untersucht

werden, ob es sich nicht um einen

Polymorphismus, d.h. um eine Veränderung

des vorliegenden DNA-Abschnittes ohne

Krankheitswert, handelt. Dies lässt sich meist

durch den Vergleich von 25 Wildtyp-Kontrollen

(entsprechend 50 Allelen) mit dem fraglichen

Bandenmuster feststellen, wobei keine der Wildtyp-Banden diese Auffälligkeit

zeigen darf. Handelt es sich um ein nicht im Wildtyp-Kollektiv vorkommendes

Bandenmuster oder um eines, bei dem ein Polymorphismus nicht sicher

ausgeschlossen werden kann, bringt allein die in Kapitel 2.7 beschriebene

Sequenzierung des DNA-Abschnittes letztendliche Klarheit.

Abbildung 2.4

SSCP-Auswer-

tung; K: Kontrolle (Wildtyp), P:

Patientenprobe mit Band-Shift

K K P K K

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